鸡粪中沙门氏菌和大肠杆菌O78多重PCR检测方法的建立

摘要

为建立同时快速检测沙门氏菌和大肠杆菌O78的方法,本研究根据沙门氏菌invA基因和太肠杆菌O78 O-抗原特异基因序列设计引物,并在细菌16S rDNA区设计内参引物,通过各项参数调整优化,建立了能够直接从样品中同时检测沙门氏菌和大肠杆菌O78的多重PCR检测方法.结果显示:该方法可以同时扩增出O781 113bp和沙门氏菌821 bp的特异片段以及细菌16S rDNA527 bp的通用片段,而对于其他13种肠道致病菌只能扩增出527 bp的细菌同源片段,具有较强的特异性.该体系检测沙门氏菌和大肠杆菌O78的最低检出限分别为103 cfu/mL和102 cfu/mL.增菌5h,鸡粪模拟污染菌样品中沙门氏菌和大肠杆菌O78的检测灵敏度分别为103 cfu/mL和102 cfu/mL.本研究建立的检测方法能够在8h内完成鸡粪样品中两种靶标菌的快速检测,对于沙门氏菌和大肠杆菌O78的鉴别诊断和快速检测具有重大意义.