组蛋白伴侣ASF1B在前列腺癌细胞的表达及其对体外细胞活力的影响

摘要

目的:探讨组蛋白伴侣抗沉默功能蛋白1B(ASF1B)在前列腺癌细胞中的表达情况及其对体外细胞活力的影响.方法:以人前列腺癌PC-3细胞为研究对象,通过小干扰RNA(siRNA)来敲减ASF1B表达.细胞分为对照组、siRNA阴性对照载体(mock)组和siRNA-ASF1B组.采用MTT法测定ASF1B-siRNA处理PC-3细胞12、24和48 h的细胞活力.采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布情况.采用RT-qPCR检测细胞中凋亡相关因子的mRNA表达水平,Western blot检测细胞中MAPK/JNK/ERK信号通路相关蛋白的表达.结果:正常细胞(良性前列腺增生)中ASF1B的蛋白水平显著低于PC-3细胞(P<0.01).与对照组和mock组相比,用siRNA-ASF1B质粒转染PC-3细胞后的ASF1B蛋白表达水平显著降低(P<0.01),并且PC-3细胞的活力显著降低(P<0.01).流式细胞术结果显示,转染siRNA-ASF1B质粒的PC-3细胞凋亡率较对照组显著升高(P<0.01),且细胞周期被阻滞于G1期.RT-qPCR结果表明,与对照组和mock组相比,转染siRNA-ASF1B质粒的PC-3细胞中p53、caspase-3、Bax和PARP-1的mRNA水平上调(P<0.01).此外,与mock组相比,siRNA-ASF1B组PC-3细胞中MAP2K4和p-JNK蛋白水平显著升高(P<0.01),而p-ERK蛋白水平显著降低(P<0.01).结论:ASF1B沉默诱导PC-3细胞G1期阻滞,促进细胞凋亡.激活MAPK/JNK/ERK信号通路可能是siRNA-ASF1B抗前列腺癌作用的机制之一.