雷帕霉素对过氧化氢诱导血管内皮细胞衰老的干预研究

摘要

目的:探讨雷帕霉素(Rapa)对过氧化氢(H2 O2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的影响及其可能的机制.方法:把HUVECs分为空白组、衰老组(H2O2诱导)、Rapa+H2O2组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)+H2O2组.噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞活力;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老情况;透射电子显微镜观察细胞超微结构改变;Western blot检测Rb、磷酸化Rb(p-Rb)、p21、LC-3II和beclin-1的表达变化.结果:与空白组相比,衰老组细胞活力下降,SA-β-Gal染色阳性率增高,细胞结构紊乱,并伴有衰老蛋白表达显著增加(P<0.01);与衰老组相比,Rapa+H2O2组细胞活力增强,细胞衰老染色减少,p-Rb和p21表达显著减少(P<0.05),电镜下细胞结构趋于正常,并可见自噬小体,beclin-1和LC3-II表达显著增多(P<0.01);与衰老组相比,给予自噬抑制剂3-MA的细胞则表现为细胞活力进一步下降,SA-β-Gal染色阳性率进一步增高,p-Rb和p21表达增多,细胞结构破坏明显,beclin-1和LC3-II几乎不表达(P<0.05).结论:Rapa可延缓H2 O2诱导的血管内皮细胞衰老,这种抗衰老作用可能与促进自噬有关.