低氧对人成熟树突状细胞MMP9/TIMP1及CCR7 表达的影响

摘要

目的: 观察低氧对人单核细胞来源成熟树突状细胞(mDCs)趋化因子受体(CCR7),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制剂(TIMP-1)表达的影响,以期为改进DCs疫苗体内迁移能力低下提供新策略.方法: 分离制备人外周血单核细胞(PBMCs),采用体外常规培养体系 [粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与白细胞介素-4(IL-4)共同刺激] 诱导DCs,于诱导后第5 d加入TNF-α促成熟,48 h后将mDCs置低氧环境下(1% O2、5% CO2、94% N2)分别继续培养6 h、12 h,设常氧对照组(21% O2、5% CO2),收获细胞及培养上清;采用RT-PCR技术检测MMP-9、TIMP-1及CCR7的表达;明胶酶谱法检测培养上清中MMP-9的水平与活性,流式细胞术检测mDCs表面CCR7的表达.结果: RT-PCR及酶谱实验结果显示,低氧6 h、12 h处理组mDCs MMP-9水平显著下降;与对照组比较,各低氧处理组mDCs均未检测到TIMP-1 mRNA表达的变化;转录及细胞表面表达分析结果显示,与常氧对照组比较,低氧6 h处理组趋化因子受体CCR7表达显著降低,而12 h处理组其表达显著回升至近常氧组水平.结论: 低氧下调mDCs MMP-9表达,破坏MMP-9/TIMP-1平衡,可能是DCs疫苗体内迁移能力低下的主要因素之一.趋化因子受体CCR7在mDCs对低氧应答中可能起重要作用.