糖尿病肾病大鼠VEGF、MMP9、TIMP1的表达及拜新同对其表达的影响

摘要

目的：观察STZ诱导的糖尿病肾病(DN)模型大鼠肾组织VEGF、MMP9／TIMPl的表达状况，以及钙离子拮抗剂拜新同对其表达的影响，进一步探讨VEGF、MMP9／TIMPl在DN发生发展过程中的作用，以及拜新同对肾脏保护作用的机制。 方法：雄性Wistar清洁级健康大鼠30只，随机分为3组：N组为正常对照组(10只)；DN组为糖尿病肾病模型组(10只)；拜新同组为糖尿病肾病拜新同干预组(10只)。糖尿病模型制备采用链脲佐菌素(Sigma公司)溶于枸橼酸缓冲液(0.1mmol／1，PH 4.5)，按50mg／Kg空腹腹腔内注射，如72小时后测血糖≥16.7mmol／1为糖尿病模型成功。4周后测24小时尿蛋白定量，当≥30mg／24h定为糖尿病肾病模型成功，模型未成功者剔除。模型成功后开始给予药物干预实验，即给予拜新同组拜新同15mg／Kg.d灌胃，每日上午一次，非干预组每日以等量清水灌胃。拜新同组干预前后均测量平均尾动脉压。于第14天和28天各组均分别处死5只大鼠，处死前1天放入代谢笼收集24h尿标本，离心后取上清液，置-70℃冰箱保存，以待测尿蛋白。随后将所有大鼠称重，分别用戊巴比妥钠45mg／kg腹腔注射；对麻醉后的大鼠心脏采血10m1，将血标本离心取上清液，置-70℃冰箱保存，以待测血清肌酐。最后剖腹取出双肾，迅速将大鼠左肾称重，留取肾脏皮质肾组织数小块以10％甲醛固定后石蜡包埋，4um切片做HE、MASSON染色及免疫组化检测大鼠肾脏VEGF的表达。取右肾分离皮质后速冻于液氮中封存用于RT-PCR检测VEGF、MMP9、TIMPlmRNA的表达。 结果：①与正常组比较， DN组大鼠血糖、平均动脉收缩压、尿蛋白定量、血肌酐均显著上升(P<0.01)；②与正常组比较，DN组大鼠肾组织肾小球肥大，肾小球毛细血管袢的毛细血管开放不良，ECM增多，肾间质炎症细胞浸润，并随病程进展病变程度加重；③与正常组比较，DN组大鼠肾组织内VEGF的蛋白表达及VEGFmRNA表达均显著增强(P<0.05或P<0.01)，④与正常组比较，4周DN组大鼠肾组织内MMP9、TIMPl mRNA表达均显著增强(P<0.05或P<0.01)，而MMP9／TIMPl的比值明显下降(P<0.05)⑤与DN组比较，拜新同组大鼠肾组织中VEGF表达均有下调(P＜0.05或P<0.01)；4周拜新同组大鼠肾组织：MMP9、TIMPl mRNA表达也显著增强(P＜0.05或P＜0.01)，而MMP-9／TIMP-1比值显著升高(P＜0.05)。⑥模型组肾组织VEGFmRNA水平与24小时尿蛋白呈明显正相关(相关系数Y为0.672和0.748，p<0.05)，VEGFmRNA水平与MMP-9／TIMP-l的比值呈明显负相关(相关系数Y分别为-0.727和-0.711，p＜0.05)结论：①DN大鼠蛋白尿增多，血压、血肌酐升高的同时也出现了VEGF、MMP9及TIMPl的表达增高，MMP9／TIMPl比值下降，提示：VEGF、MMP9／TIMPl均参与了DN发生的病理生理过程。②拜新同干预后，DN大鼠蛋白尿和血压、血肌酐改善的同时出现VEGF表达下调，MMP9及TIMPl的表达增高，而MMP9／TIMPl比值升高，提示拜新同对肾脏的保护作用除了与改变肾血流动力学有关外，还可能是通过改变VEGF、MMP9／TIMPl的表达状况而实现。

目录

文摘

英文文摘

原创性声明及关于学位论文使用授权说明

第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果

第四章讨论

第五章结论

参考文献

综述糖尿病的肾脏微血管病变

致谢

攻读学位期间主要的研究成果