外源性TGF-β_1对NB4细胞内源性TGF-β_1的影响及其促凋亡机制的研究

摘要

目的: 研究转化生长因子β_1 (TGF-β_1)作用于NB4细胞后的细胞凋亡情况、细胞周期改变及内源性TGF-β_1、P27~(Kip1)、cyclin E及bcl-2 mRNA水平的变化.方法: 瑞氏-吉姆萨染色观察凋亡细胞形态学的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;半定量RT-PCR技术检测内源性TGF-β_1、P27~(Kip1)、cyclin E以及bcl-2的mRNA水平.结果: TGF-β_1能抑制NB4细胞的生长,促进NB4细胞的凋亡.5 μg/L TGF-β_1使NB4细胞阻滞在G1期.外源性TGF-β_1浓度<5 μg/L时,内源性TGF-β_1的mRNA表达上调,外源性TGF-β_1浓度为10 μg/L时,内源性TGF-β_1 mRNA表达下调.5 μg/L TGF-β_1可使P27~(Kip1)表达上调、cyclin E、bcl-2表达下调.结论: TGF-β_1可诱导NB4细胞凋亡,引起细胞周期分布异常;外源性TGF-β_1可能通过(1)上调内源性TGF-β_1,从而使下游因子P27~(Kip1)高表达以诱导NB4细胞凋亡;(2)TGF-β_1直接抑制了cyclin E的表达,或者通过调高P27~(Kip1)的表达反馈抑制cyclin E的活性,进而导致细胞周期阻滞;(3)通过下调bcl-2而诱导NB4细胞凋亡.高浓度的外源性TGF-β_1可拮抗内源性TGF-β_1表达,可能与其导致TGF-β_1受体突变,或存在TGF-β_1受体靶点过饱和现象有关.