一种用于内耳siRNA转染的新型蛋白载体

摘要

目的 通过体外实验与脂质载体LipoFiterTM进行对比,验证小干扰RNA(siRNA)蛋白载体TAT-DRBD载体在耳蜗的转染效率及安全性.并在卡铂南美栗鼠内耳损害实验模型中,通过TAT-TRBD载体携带siRNA特异性下调铜转运蛋白Slc31a1基因的表达,验证对毛细胞的保护.方法 离体条件下,应用TAT-DRBD携带Cy3标记的siRNA转染新生SD大鼠耳蜗基底膜,12小时后激光共聚焦显微镜观察;TAT-DRBD及LipoFiterTM载体转染新生SD大鼠耳蜗基底膜48小时后计数毛细胞丢失及损伤情况.南美栗鼠在接受单次腹腔内卡铂注射前24小时左耳通过TAT-DRBD载体行Slc31a1基因特异性siRNA转染,右耳为对照,12天后处死并通过行全耳蜗基底膜铺片计数毛细胞丢失比例.结果 在离体耳蜗器官型培养中,TAT-DRBD可高效转染Cy3标记的siRNA进入毛细胞,效率几达100％.新生SD大鼠耳蜗基底膜中段在加入脂质体LipoFiterTM48小时后会导致严重的耳基底膜内、外毛细胞损害及纤毛排列紊乱;TAT-DRBD组却无明显毛细胞丢失及纤毛排列紊乱.在活体南美栗鼠,治疗耳的内毛细胞(IHC)仅在距蜗尖(Apex)45％～85％距离处有不超过20％的毛细胞丢失.而对照组全程均有IHC损害,在距蜗尖65％～75％处有近40％的IHC丢失.结论 TAT-DRBD作为一种新型的基因重组蛋白载体,在离体条件下可有很高的转染效率且无明显耳毒性作用,在内耳转染安全性方面较脂质体有明显优势.通过RNAi手段特异性抑制铜离子跨膜转运蛋白表达可以有效降低卡铂耳毒性.