阻断肝细胞坏死性凋亡诱导自噬抑制加重小鼠肝脏缺血再灌注损伤

摘要

目的 研究阻断肝细胞中RIPK3（receptor-interacting protein kinase 3）诱导的坏死性凋亡对小鼠肝脏缺血再灌注损伤（IRI）的影响。方法 60只小鼠采用Stata统计软件随机分为4组：野生型（WT）对照组、肝特异性敲除RIPK3（HKO）对照组、WT-IRI组,HKO-IRI组。对照组进行假手术,即开腹后仅游离肝门部血管,不阻断血流,WT-IRI组和HKO-IRI组开腹后游离肝门血管并阻断肝左叶和肝中叶的血供90 min,然后开放血管6 h,取各组小鼠的血液和肝组织样本,检测肝功能,免疫组织化学及HE染色检测炎症浸润及肝损伤,蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、P62。并提取WT小鼠和HKO小鼠原代肝细胞,分为对照组和缺氧复氧组（HIR组）。贴壁后HIR组缺氧4 h,复氧4 h,取上清液检测ALT、AST,细胞提取蛋白检测LC3-Ⅱ、P62。结果 与对照组相比,IRI组小鼠肝组织明显受损,但是与WT-IRI组相比,HKO-IRI组肝损伤显著加重（P＆0.05）,进一步研究发现其肝组织中LC3-Ⅱ蛋白含量明显下降,P62蛋白含量增加。同样,肝细胞缺氧复氧后,相对于WT鼠,HKO来源的肝细胞损伤也更重。结论 RIPK3敲除阻断肝细胞坏死性凋亡后,通过抑制自噬加重了肝IRI。