维甲酸和茶多酚对结肠癌细胞微卫星序列不稳定的抑制作用

摘要

目的以复制错误(replication error, RER+)表型的人结肠癌细胞株RKO作为靶细胞,研究全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid, ATRA)和茶多酚(polyphenon, PP)对肿瘤细胞微卫星序列(microsatellite sequence, MS)突变的影响,并观察肿瘤细胞内碱基错误配对修复(mismatch repair, MMR)基因hMLH1和hMSH2的表达情况.方法将含有外源性MS(CA)14的穿梭质粒pCMV-CAR转染RER+人结肠癌细胞株RKO.外源性的(CA)14的突变可使质粒标记基因Lac Z恢复正常读码,表达产生β-半乳糖苷酶,后者使X-gal变蓝.全反式维甲酸和茶多酚对MS的影响可直接通过X-gal染色结果判断.利用逆转录-聚合酶链反应方法,检测经全反式维甲酸和茶多酚处理的RKO细胞中碱基错误配对修复基因hMLH1和hMSH2的表达情况.结果全反式维甲酸1 μmol/L、0.1 μmol/L,茶多酚3 μg/ml,对RKO细胞的增殖无明显的影响.作用1周后,均显示对外源性(CA)14的突变有明显的抑制效应.但不能诱导hMLH1和hMSH2表达.结论全反式维甲酸和茶多酚能抑制RER+细胞中外源性(CA)14重复序列突变,提示两者对人癌细胞MS遗传不稳定有保护作用.其作用机理可能不是通过影响hMLH1和hMSH2的表达而起作用.