绿脓假单胞菌多重耐药机制的研究

摘要

目的 调查我院2003-2005年临床分离多重耐药绿脓假单胞菌的氨基糖苷类修饰酶基因、β内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白oprD2基因存在状况;并研究整合子参与绿脓假单胞菌多重耐药的机制.方法 纸片扩散法测定绿脓假单胞菌对14种抗菌药物的药物敏感性,并筛选出14株多重耐药菌株;聚合酶链反应检测氨基糖苷类修饰酶基因、β内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白oprD2基因;聚合酶链反应检测整合子5′保守区的整合酶基因和3′保守区的qacE△1-sulI基因,对整合酶基因的阳性扩增产物的限制性片段长度多态性分析进行整合子分类,整合子可变区扩增并测序.结果 14株绿脓假单胞菌对14种抗菌药(哌拉西林等)的耐药率为14.3%～100.0%;氨基糖苷类修饰酶基因ant(2")-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ和aac(3)-Ⅰ检出率分别为78.6%、57.1%、57.1%、14.3%、7.1%、0;β内酰胺酶编码基因TEM和IMP的检出率分别为92.9%和42.9%,未检出VIM、OXA、PER、GES和SHV基因,1株外膜通道蛋白oprD2基因缺失;整合酶基因及qacE△1-sulI基因检出率分别为85.7%和78.6%,整合子可变区扩增有3种片段:1 000、1 300和1 700,测序证实分别为aadA2、aadA6-orfD和dfrⅫ-orfF-aadA2,其中aadA2是首次在绿脓假单胞菌的整合子中检出,aadA6-orfD是一种新型的整合子可变区基因盒组合形式,Genbank号分别为DQ091178和DQ091179.结论 我院多重耐药绿脓假单胞菌对β内酰胺类抗生素的耐药主要与TEM和IMP型耐药基因有关,对氨基糖苷类抗生素的耐药主要与氨基糖苷类修饰酶基因ant(2")-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ和aac(6')-Ⅱ有关;整合子参与了绿脓假单胞菌的耐药和多重耐药.