焦磷酸测序法检测乙肝病毒P区基因耐药突变的临床应用研究

摘要

目的探讨焦磷酸测序法检测乙型肝炎病毒（HBV）P区基因耐药突变的可靠性及临床应用。方法以Sanger测序法为参考,验证焦磷酸测序法检测HBV P区基因耐药突变的性能。选取2009年6月至2012年8月温州医科大学附属第一医院及武汉大学人民医院确诊的慢性乙型肝炎（乙肝）患者1164例,采用焦磷酸测序法检测1164例临床慢性乙肝患者HBV P基因耐药突变,记录HBV DNA定量结果,统计HBV P区耐药基因各突变位点以及突变频率,并统计分析患者耐药突变的特点。结果焦磷酸测序法和Sanger测序法检测HBV P区基因耐药突变时,所需HBV DNA最低量为1×10~3 KIU/L,但焦磷酸测序法优于Sanger测序法,能稳定、特异地检出突变比例低至10%的突变位点。248例慢性乙肝患者HBV P区基因耐药突变位点均低于检测下限;919例患者有阳性结果,其中61.5%没有发生突变,38.5%发生突变（单个位点突变为47.5%,联合突变为52.5%）。除rtI169T位点和rtA194T位点未检到突变外,其他位点都有不同程度的突变;耐药位点以rtM204V/I（32.1%）、rtL180M（19.8%）、rtA181V/T（6.7%）、rtN236T（5.3%）为主,其中rtA181V/T和rtN236T位点发生部分突变比例较高。结论焦磷酸测序法具有灵敏、特异、准确等特点,能早期检测核苷（酸）类似物治疗患者的HBV P区基因发生耐药突变,适用于慢性乙肝患者核苷（酸）类似物的治疗监测;HBV P区基因不同耐药位点和耐药频率可能与临床用药习惯相关。