HPLC法测定CRF血浆抗坏血酸及脱氢抗坏血酸水平的研究

摘要

目的 应用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)和电化学检测技术建立快速测定慢性肾衰竭(chonic renal failure,CRF)患者血浆抗坏血酸(ascorbic acid,AA)及脱氢抗坏血酸(dehydroascorbic acid,DHAA)含量的方法.方法 应用15%的偏磷酸溶液作为血液样本的蛋白沉淀剂及抗坏血酸的保护剂,处理后血浆样品-70℃保存,可极大提高血样中抗坏血酸的稳定性;分析柱为Inertsil ODS-3(DIKMA)150mmx4.6mm,4.5μm;进样量为10 μl,流速为0.8 ml/min,电压为0.8 V,柱温25℃;流动相由50 nmol/L磷酸钾和1 mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)溶液组成,pH为3.0.结果 线性范围2 μmol/L至200 μmol/L;其峰高与浓度的相关系数大于0.999;抗坏血酸的平均回收率为101.89%,AA的日内(n=5)和日间(n=5)的平均相对标准偏差(RSD)分别为1.710%和5.915%.结论 用高效液相色谱和电化学检测法检测CRF患者血浆中从及DHAA含量,特异性强,灵敏度高.