共表达p53及siRNA-VEGF质粒的构建及其在PC-3细胞中的表达

摘要

目的 构建可同时表达野生型p53 (wt-p53)及siRNA-VEGF的重组真核表达载体用于激素非依赖性前列腺癌的联合基因治疗.方法 利用亚克隆、T-A克隆和PCR技术合成并构建pcDNA3.1-p53,siRNA-VEGF,p53/siRNA-VEGF及siRNA-scramble重组质粒.以脂质体法将上述重组质粒转染至PC-3细胞,PCR鉴定p53,VEGF基因的表达.结果 克隆出wt-p53全长及带有U6启动子的siRNA-VEGF序列,经DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建上述五种真核重组表达载体.转染细胞48 h后可见GFP(siRNA-VEGF组)明显表达;RT-PCR检测到转染后PC-3细胞中 wt-p53表达增强,而VEGF表达下调.结论 p53/siRNA-VEGF共表达载体的构建及其在PC-3细胞中的表达为进一步研究wt-p53和VEGF双基因对人前列腺癌作用机制为治疗作用奠定了基础.