小檗碱在高糖及糖基化终末产物诱导足细胞损伤中的保护作用

摘要

目的探讨小檗碱对糖基化终末产物(AGE)和高糖诱导下足细胞损伤及其骨架蛋白的影响及机制。方法以条件永生性人足细胞作为研究对象,于含10%胎牛血清及100 U/Lγ-干扰素的RPMI 1640培养液中进行体外培养,细胞增殖并诱导分化后进行分组处理。分别用高糖(30 mmo/L)、AGE(100μg/ml)、小檗碱(10μmo/L)处理48 h后,激光共聚焦检测技术观察纤维状肌动蛋白(F-actin),球状肌动蛋白(G-actin)变化;原位细胞免疫组化检测cspase-3,nephrin表达。采用SPSS13.0统计软件包进行统计学分析。结果共聚焦显微镜下观察显示,高糖及AGE作用下,足细胞F-actin出现重排,G-actin易位,小檗碱干预后有所恢复。免疫组化结果显示,对照组及高糖组几乎未见capase-3阳性表达,但高糖+AGE组,capase-3呈阳性表达(F=99.339,P<0.001);高糖+AGE组nephrin表达显著降低(F=165.84,P<0.001),与对照组及高糖组比较,差异均有统计学意义。小檗碱作用后,高糖+AGE组capase-3的水平下降(F=6.927,P=0.048),nephrin表达水平升高(F=165.84,P=0.025),差异均有统计学意义。结论在持续的高糖和AGE作用下,可引起足细胞骨架蛋白F-actin、G-actin重构及分布异常,并诱导足细胞凋亡,小檗碱能改善高糖和AGE引起的足细胞骨架蛋白损伤,并抑制足细胞的凋亡,其机制可能与nephrin的参与有关。