MG-132对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化与凋亡的影响

摘要

目的:探讨蛋白酶体抑制刺MG-132对体外培养的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化和凋亡的影响及其机制.方法:体外培养HK-2细胞,随机分组:对照组,TGF-β1刺激组(5μg/L),MG-132组(2.5μmol/L),MG-132+TGF-β1组(MG-132 2.5 μmol/L孵育30 min后再加TGF-β15 μg/L).培养24 h后收集细胞,RT-PCR法检测Smurf1、Smurf2和Smad7 mRNA的表达;Western免疫印迹检测Smurf1、Smurf2、Smad7和P-IkB-α和IkB-α蛋白表达;免疫组织化学检测胞浆中Fn和α-SMA的表达;Hoecht 33258染色免疫荧光检测细胞凋亡形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:TGF-β1刺激组HK-2 Smurf1、Smurf2 mRNA及蛋白表达水平较对照组高(P＜0.05),但Smad7 mRNA及蛋白表达水平较对照组低(P＜0.05),且胞浆中FN和α-SMA水平较对照组高(P＜0.05).MG-132+TGF-β1组与TGF-β1刺激组比较,Smurf1、Smurf2 mRNA表达降低(P＜0.05),Smad7 mRNA略升高(P＞0.05),而Smad7蛋白明显升高(P＜0.05),胞浆中Fn和α-SMA表达减少.MG-132组、MG-132+TGF-β1组分别与对照组及TGF-β1组比较,P-IkB-α和IkB-α蛋白浓度升高,细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MG-132可抑制TGF-β1诱导的HK-2Smurf1、Smuif2的表达,促进Smad7表达,抑制其降解,减轻FN和α-SMA的表达,从而抑制HK-2转分化;另一方面,MG132可能通过抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞NF-kB活化促进HK-2细胞凋亡.