SET缺陷对三氯乙烯诱导L-02细胞增殖和凋亡及组蛋白去乙酰化酶的影响

摘要

目的比较三氯乙烯（trichloroethylene,TCE）诱导人正常肝细胞（L—02细胞）和SET基因缺陷L—02细胞（SET缺陷细胞）中细胞增殖、凋亡、组蛋白去乙酰化酶活力及表达水平的变化,探讨TCE染毒对组蛋白修饰的影响及SET在表观遗传调控中的作用。方法选用前期建立的SET缺陷细胞为研究对象,以未经TCE处理的L—02细胞和SET缺陷细胞作为各自的对照组,用2.00和8.00 mmol/LTCE染毒两种细胞24 h,用CCK-8法和Hoechst 33342染色法检测细胞的增殖水平和凋亡率。用0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00mmol/L TCE染毒两种细胞,检测细胞的组蛋白去乙酰化酶活力和蛋白去乙酰化酶的蛋白表达水平。结果TCE 8.00 mmol/L染毒组SET缺陷细胞与L—02肝细胞比较,增殖水平呈下降趋势,凋亡率呈上升趋势,且差并均有统计学意义（t值分别为—4.362和23.950,P＜0.05）。TCE处理L—02肝细胞和SET缺陷细胞后均引起细胞增殖水平的下降和凋亡率的升高,当TCE浓度达到8.00 mmol/L时,两组细胞间的增殖水平和凋亡率的差异有统计学意义（t值分别为—4.362,和23.950,P值均小于0.05）。使用0,0.25,0.50,1.00,2.00,4.00和8.00 mmol/LTCE处理L—02细胞和SET缺陷细胞24 h后,两种细胞的组蛋白去乙酰化酶活力水平均呈现上升趋势。其中,当TCE染毒浓度到达0.50 mmol/L时,与L-02细胞对照组比较,L—02细胞组组蛋白去乙酰化酶活力明显升高,差异有统计学意义（F值为403.26,P＜0.01）;TCE为1.00 mmol/L时酶活力最高。与SET缺陷细胞对照组比较,当TCE达到1.00 mmol/L时,SET缺陷细胞组蛋白去乙酰化酶活力明显升高,差异有统计学意义（F值为44.01,P＜0.01）。与同染毒剂量的L—02细胞比较,当TCE染毒剂量到达0.50 mmol/L时,SET缺陷细胞的组蛋白去乙酰化酶活力均低于L-02细胞,差异有统计学意义（P＜0.05）。与L—02细胞对照组比较,TCE染毒的L—02细胞HDAC2的蛋白表达水平明显上调,差异有统计学意义（F值为79.99,P＜0.01）;TCE染毒的SET缺陷细胞HDAC2蛋白表达水平变化无明显规律。结论TCE染毒可以诱发L—02细胞细胞增殖水平、凋亡率、组蛋白去乙酰化酶活力及相关蛋白表达水平的改变,SET缺陷可以明显抑制TCE染毒引起的细胞增殖、凋亡以及组蛋白修饰的异常。