人喉癌长春新碱耐药细胞株的建立及其生物学特性

摘要

目的:建立人喉癌长春新碱多药耐药细胞系.方法:以药物浓度梯度递增法诱导筛选人喉癌Hep-2的多药耐药细胞株Hep-2/v,比较两组细胞的形态和倍增时间;MTT法确定细胞的IC50及其耐药指数;流式细胞仪检测两组细胞的细胞周期分布以及细胞内的罗丹明聚集情况;实时定量RT-PCR法检测MDR1基因的mRNA表达,Western blot法检测相应的蛋白表达情况.结果:建成的Hep-2/v耐药细胞株,其耐药性能稳定,耐药指数为45,并与顺铂及5-氟尿嘧啶有不同程度的交叉耐药性;Hep-2/v的体外群体细胞倍增时间较亲代细胞延长13.58小时;细胞周期分析结果显示其G_0/G_1期细胞升高,而S期细胞则明显降低(P＜0.05);罗丹明染色显示,Hep-2细胞内的罗丹明较Hep-2/v明显升高(P＜0.01);Hep-2/v细胞MDR1表达在基因及蛋白水平明显高于Hep-2细胞(P＜0.01).结论:Hep-2/v细胞株具有明确及稳定的多药耐药性,是研究多药耐药机制及筛选逆转剂的良好模型.