双分子荧光互补分析法检测α-突触核蛋白的聚集及在细胞间的传播

摘要

目的 利用双分子荧光互补(BiFC)分析检测 α-突触核蛋白的聚集及在细胞间的传播.方法 首先利用高灵敏的荧光素酶human Gaussiaprinceps luciferase作为报告蛋白,将其N端(1～93)与C端(94～169)分别与 α-突触核蛋白的C端融合,记作L1和L2,并将L1和L2同时在SK-N-SH细胞中共同表达,结果显示BiFC分析可以特异地检测出 α-突触核蛋白的聚集.接下来将L1和L2分别在SK-N-SH细胞中表达,收集L1的培养基加入到表达L2的细胞中.同理,收集L2的培养基加入到表达L1的细胞中.结果 BiFC分析可检测到 α-突触核蛋白在细胞间传播.结论 BiFC可有效检测 α-突触核蛋白的聚集及在细胞间传播.