降钙素基因相关肽衍生物克隆表达与活性鉴定

摘要

目的 利用基因工程方法获得降钙素基因相关肽(CGRP)的衍生物(CGRP-VY),并初步鉴定其生物学活性.方法 以pET-CGRP重组质粒为模板,用PCR方法扩增编码CGRP-VY的基因片段,将该基因片段定向克隆到pET-32a(+)载体上,构建pET-CGRP-VY重组质粒,转化E.coli JM109菌株,经扩增提取重组质粒,酶切和测序鉴定;将鉴定正确的重组质粒pET-CGRP-VY转化E.coli BL21trxB(DE3)pLysS菌株,经IPTG诱导后,收集并裂解菌体,SDS-PAGE电泳检测蛋白的表达;通过粗提物扩张蟾蜍肠系膜微循环血管实验,初步鉴定CGRP-VY扩张血管的活性,并与重组CGRP进行活性比较.结果 获得了含有CGRP成熟肽编码基因序列(111 bp)及缬氨酸和亮氨酸的密码子序列(6 bp)的重组质粒pET-CGRP-VY,符合预期结果;经诱导后在E.coli中表达出21.2kD的融合蛋白,初步证明其粗提物具有扩张血管的功能.结论 成功获得具有生物学活性的融合蛋白CGRP衍生物(CGRP-VY),为进一步进行其降血压功能研究奠定了实验基础.