摘要:目的:利用基因工程方法获得降钙素基因相关肽(cgrp)的衍生物(cgrp vy),并初步鉴定其生物学活性。方法:以pet cgrp重组质粒为模板,用pcr方法扩增编码cgrp vy的基因片段,将该基因片段定向克隆到pet 32a(+)载体上,构建pet cgrp vy重组质粒,转化e.coli jm 109菌株,经扩增提取重组质粒,酶切和测序鉴定;将鉴定正确的重组质粒pet cgrp vy转化e.coli b12 1trxb(de3)plyss菌株,经iptg诱导后,收集并裂解菌体,sds page电泳检测蛋白的表达;通过粗提物扩张蟾蜍肠系膜微循环血管实验,初步鉴定cgrp vy扩张血管的活性,并与重组cgrp进行活性比较.结果:获得了含有cgrp成熟肽编码基因序列(111bp)及缬氨酸和亮氨酸的密码子序列(6 bp)的重组质粒pet cgrp vy,符合预期结果;经诱导后在e.coli中表达出21.2kd的融合蛋白,初步证明其粗提物具有扩张血管的功能.结论:成功获得具有生物学活性的融合蛋白cgrp衍生物(cgrp vy),为进一步进行其降血压功能研究莫定了实验基础.