原代培养大鼠肝星状细胞、枯否氏细胞及肝素的干预作用

摘要

目的同步分离培养大鼠肝星状细胞及枯否细胞,应用肝素进行干预,观察肝素在体外对肝星状细胞及枯否细胞的影响.方法应用Nycodenz一步密度梯度离心法一步分离肝纤维化大鼠的肝星状细胞及枯否细胞.分别将不同浓度的肝素加入肝星状细胞和枯否细胞培养板中,应用MTT比色法检测各组肝星状细胞和枯否细胞的增殖状况,免疫细胞化学检测各组肝星状细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、层连蛋白(LN)的表达.结果加入高浓度肝素、低浓度肝素及未用药的肝星状细胞0D值分别为0.0626±0.0137、0.0746±0.0131和0.1106±0.0198.加入高浓度肝素、低浓度肝素及未用药的枯否氏细胞0D值分别为0.1340±0.0270、0.1540±0.270和0.2120±0.0444.二肝素组肝星状细胞、枯否氏细胞0D值均显著低于未加药组.高浓度肝素组肝星状细胞及枯否氏细胞0D值较低浓度肝素组为低,但无显著性差异.加入肝素的肝星状细胞α-SMA、TGF-β1,LN的表达较未用药的肝星状细胞为弱.高浓度肝素组α-SMA、TGF-β1 LN的表达较低浓度肝素组弱.结论肝素可抑制肝星状细胞的增殖、活化及胶原的分泌,且对枯否氏细胞也具有抑制作用.