抗人γ-精浆蛋白单链抗体四聚体的构建及表达

摘要

目的构建抗γ-精浆蛋白(γ-Sm)单链抗体(scFv)/p53四聚功能域(p53TD)融合基因,并进行真核表达和活性测定.方法利用递归聚合酶链反应(PCR)法扩增IgG3上游铰链区与p53TD融合基因,克隆入pUC19载体中构建pUC19/IgG3/p53克隆载体.将抗γ-Sm scFv克隆入该载体中,构建抗γ-Sm scFv/p53TD融合基因并克隆入真核表达载体pSecTag2-B,转染HeLa细胞表达纯化后,利用流式细胞仪(FCM)进行活性测定.结果获得了抗γ-Sm scFv/p53TD融合基因,基因全长891 bp,可编码297个氨基酸.表达产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western印迹实验证实为约35×103的特异蛋白条带,纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合PC-3细胞,亲和力高于scFv.结论获得了可与PC-3细胞特异结合的四价抗γ-SmscFv,为进一步临床应用奠定基础.