肾组织冰冻切片中血红素氧合酶-1的免疫组织化学检测

摘要

目的探讨大鼠肾脏组织冰冻切片中血红素氧合酶-1（HO-1）的免疫组织化学检测方法及其干扰因素。方法腹腔内注射钻原卟啉（CoPP）诱导Wistar大鼠（n=24）肾脏高表达HO-1;比较常规链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法（n=8）、SP+蛋清封闭法（n=8）和Dako EnVision二步法（n=8）消除非特异性染色的效果,并通过检测已知阳性组织的HO-1表达加以验证。结果Western blot法检测证实CoPP成功诱导全部24只Wistar大鼠肾脏高表达HO-1。用免疫组织化学法检测HO-1在大鼠肾脏组织中的表达时,可见（1）正常大鼠肾组织仅部分大血管区有内源性过氧化物酶的着色,能被0.3%H2O2·甲醇或3%H2O2消除;（2）正常大鼠肾组织有丰富的内源性生物素表达,常规SP法染色（n=8）出现较强的非特异性染色;SP+蛋清封闭法染色（n=8）不能消除非特异性染色,反而有放大作用;Dako EnVision二步法（n=8）可以有效消除非特异性染色,良好显示HO-1在肾脏组织中的分布。结论内源性生物素是冰冻切片免疫组织化学染色的主要干扰因素;常规SP法或加用蛋清封闭不能消除其干扰;EnVision二步法可以有效避免非特异性干扰,良好的显示HO-1在阳性肾脏组织中的表达。