破骨细胞分化因子胞外区的克隆表达与纯化

摘要

目的 破骨细胞分化因子的克隆 ,重组蛋白的表达及纯化。方法 自 1g死胎肝组织中提取总RNA ,反转录cDNA后作为模板 ,设计上下游引物 ,多聚酶链反应 （PCR）扩增出目的片段。将PCR产物克隆至组氨酸标签的融合蛋白表达载体 pProEXTM HTc ,并送测序。在异丙基硫代 β D 半乳糖苷 （IPTG）诱导下 ,可以稳定表达出破骨细胞分化因子胞外区蛋白 ,用镍离子交换柱纯化该蛋白。结果 逆转录 多聚酶链反应 （RT PCR ）扩增出特异的目的条带 ,75 0bp大小。测序结果完全正确。诱导后可以表达重组蛋白 ,相对分子质量为 3 2× 10 3 。结论 RT PCR可以简便的扩增目的基因。重组破骨细胞分化因子蛋白可以通过大肠杆菌原核表达载体诱导表达得到。