小鼠PD-1 胞外区基因片段表达、纯化及其多克隆抗体的制备

摘要

目的:原核表达并纯化小鼠PD-1膜外区(以下简称mPD-1)蛋白,制备其多克隆抗体.方法:原核表达质粒pGEX-4T-1/mPD-1转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白的表达.对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测.利用蛋白质纯化仪纯化蛋白.使用纯化蛋白免疫日本大耳白兔3次后,分离抗血清,ELISA法测定兔多克隆抗体滴度.用其制备的多克隆抗体通过细胞免疫荧光方法(CIF)和FCM检测高表达PD-1全长基因的L929细胞.结果:诱导表达并纯化了GST-mPD-1重组蛋白,得到相对分子质量(Mr)约42 000的mPD-1蛋白.纯化蛋白免疫动物后,产生特异的高滴度抗体(ELISA滴度达1∶1 562 500).CIF和FCM结果显示抗血清与L929细胞表面PD-1有高度的特异性结合活性.结论:成功获得高纯度的mPD-1重组蛋白,免疫动物后,获得了特异、高效价的抗体,为将mPD-1蛋白及抗体用于PD-1的生物学研究及抗肿瘤治疗的实验研究奠定了基础.