眼部感染热带念珠菌基因分型的初步研究

摘要

目的 建立随机扩增DNA多态性(RAPD)反应体系对热带念珠菌进行基因分型.方法 从14例真菌感染的眼部病变处取材并根据真菌菌落外观、菌丝、孢子及菌细胞形态进行菌种鉴定,采用Neo-Sensitab抗真菌药敏纸片进行药物敏感试验.分别提取14株眼部感染热带念珠菌临床分离株的基因组DNA,依次用随机引物OPA-18、OPE-18、RSD-6、OPG-10对其进行PCR扩增,图谱分析后用非加权配对算术平均法(UPGMA)绘出亲缘关系聚类图.结果 14株热带念珠菌对两性霉素B、酮康唑、氟康唑和氟胞嘧啶的敏感率依次为50.00%、85.71%、100.00%和100.00%.采用引物OPG-10和RSD-6构建的RAPD-PCR体系可以扩增出质量较好的带谱,多态性位点依次为71.42%和72.41%.采用引物OPG-10进行RAPD-PCR产物构建的亲缘关系聚类图中,对两性霉素B敏感的第1、2、3、4、5、6株热带念珠菌与对两性霉素B耐药的第14株热带念珠菌聚成一簇,而其余对两性霉素B耐药的第7、8、9、10、11、12、13株聚成一簇.采用引物RSD-6进行RAPD-PCR产物构建的亲缘关系聚类图中,对两性霉素B敏感的第1、2、3、4、5、6株聚成一簇,而对两性霉素B耐药的第7、8、9、10、11、12、13、14株聚成一簇.结论 采用引物RSD-6构建的RAPD-PCR反应体系可以较好地进行热带念珠菌的分子分型,对两性霉素B敏感株和耐药株进行鉴定.