NY-ESO-1致敏树突状细胞诱导的细胞毒性T淋巴细胞对视网膜母细胞瘤细胞的特异性

摘要

背景目前用细胞免疫的方法治疗视网膜母细胞瘤（RB）成为新的研究热点，肿瘤-睾丸抗原是最具免疫原性的人类肿瘤抗原之一，已用于全身一些肿瘤的免疫治疗，但其对RB治疗作用的研究报道较少。目的探讨肿瘤-睾丸抗原的NewYork—esophageal-1（NY—ESO-1）致敏树突状细胞（DCs）诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对RB细胞株HXO—RB44的杀伤作用。方法用聚合酶链反应（PCR）技术对NY—ESO-1质粒的目的基因片段进行扩增，使用SalⅠ限制酶和EcoRI限制酶进行双酶切，切胶回收DNA片段。将其连接入pDC316质粒，构建pDC316／NY—ESO．1真核表达载体并再进行酶切鉴定。免疫荧光及Western blot法检测NY—ESO-1蛋白在HXO．RB44细胞株中的表达。Ficoll法分离血获得单个核细胞，通过RPMI1640重悬，调整细胞密度为1×10。个／ml，通过重组人集落刺激因子（rhGM—CSF）和重组人白细胞介素4（rhlL-4）诱导培养外周血来源的DCs，通过重组质粒转染DCs，以脂多糖诱导DCs成熟，DCs与淋巴细胞数量比为1：25的比例混合培养HXO．RB44细胞，通过MTT法检测CTL的增生情况。在培养液中同时加入CTL细胞，MTT法检测HXO—RB44细胞的活力。结果重组质粒pDC316／NY—ESO-1的目的片段序列与NY-ESO-J基因序列完全相同，酶切鉴定结果与预期一致。Western blot法以及免疫荧光检测结果显示，NY—ESO．1在细胞株HXO．RB44中呈强阳性表达。经rhGM．CSF和rhlL-4成功诱导出的外周血DCs，重组质粒转染后其表型分子分别是HLA—DR为42．1％，CD80为54．2％，CD83为39．7％，CD86为94．8％。MTT法检测表明，pDC316／NY—ESO-1质粒转染的DCs诱导的CTL组的增生能力强于未转染组，致敏的DCs与淋巴细胞比例为1：100时诱导CTL效果最为显著，与未转染组比较差异有统计学意义（P〈0．05），CTL对肿瘤细胞的杀伤作用明显强于未转染组和无DCs组，且效靶比为75：1时杀伤率最强，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论NY—ESO-1质粒转染DCs诱导的CTL对RB细胞具有特异性杀伤作用，为RB免疫治疗提供了一种新的方法。