乙二醇为主体的玻璃化溶液对小鼠桑椹胚的超低温保存

摘要

本试验系统地研究了以低毒性的乙二醇为主体,添加葡聚糖和海藻配制成的玻璃化溶液(EDT20,EDT30及EDT40),在室温(20 ℃或25 ℃)下对小鼠体内受精的桑椹胚进行玻璃化冷冻保存.毒性试验表明,30%葡聚糖溶液(D),0.5mol/L海藻糖溶液(T),以及两种物质的混合液即DT溶液,对胚胎均无化学毒性作用,乙二醇是化学毒性的主要来源.且随着乙二醇浓度的增加和平衡时间的延长,对胚胎的化学毒性也增大.小鼠桑椹胚的玻璃化冷冻试验中,20 ℃室温下胚胎冷冻效果好于25 ℃,但差异无显著意义(P>0.05).在20℃室温下,胚胎于EDT30中平衡1 min,后直接投入液氮中一步法冷冻后胚胎体外发育率、移植妊娠率和产仔率分别为94.00%、45.00%、38.00%,与对照组差异均无显著意义(P>0.05).若将胚胎在10%EG中平衡5 min,再移入EDT30中平衡30 s二步法冷冻效果最佳,解冻后囊胚发育率、移植妊娠率和产仔率分别为96.00%、57.00%、52.00%,与对照组差异均无显著意义(P>0.05).