结核分枝杆菌mRNA在利福平快速药敏试验中的初步应用

摘要

目的建立一种Mycobacterium tuberculosis(结核分枝杆菌,MTB)mRNA快速敏感的检测方法并初步探讨其在利福平快速药敏试验中的应用.方法用超声粉碎和Tripure试剂提取MTB总RNA,针对α抗原85B的特定编码序列建立MTB mRNA的RT-PCR检测方法;观察MTB在含1、2、4 μg/ml利福平的液体培养基中生长时,85B mRNA的动态改变,确定快速检测利福平耐药菌株的最佳药物浓度和时间点,比较RT-PCR和快速培养法对20株临床分离菌株利福平耐药性检测的差异性.结果 85B mRNA的RT-PCR最低检测下限为1 000个细菌.85B mRNA的动态结果表明,在4 μg/ml利福平中培养24 h为最佳药物浓度和时间点.RT-PCR和快速培养法对20株临床菌株利福平药敏试验检测结果无显著差异(χ2=0.5,P＞0.05),但前者能显著缩短药敏检测周期.结论检测结核分枝杆菌mRNA的RT-PCR方法可望应用于利福平快速药敏试验.