RT-PCR检测结核分枝杆菌mRNA在利福平快速药敏试验中的初步应用

摘要

[目的]:建立一种快速敏感的结核杆菌mRNA的检测方法;摸索检测结核杆菌mRNA用于利福平快速药敏试验时的各项参数,从而建立一种新的利福平分子生物学药敏试验方法;比较新建方法与BacT/AlERT 3D快速培养法对20株临床分离株的药敏检测结果,分析检测结核杆菌mRNA在利福平临床快速药敏试验中的应用价值.[材料与方法]:实验第一部分,以结核杆菌标准菌株H37Rv(ATCC27294)为实验菌株,经M 7H9液体培养基培养,获得其对数生长期的菌悬液;采用Tripure总RNA分离试剂辅以超声粉碎的方法提取结核杆菌总RNA;然后用DNase消化总RNA中污染的基因组DNA;针对α抗原85B的特定编码序列设计引物,逆转录扩增结核杆菌mRNA,产物用琼脂糖凝胶电脉检测分析,建立结核杆菌mRNA的RT-PCR检测方法.[结论]:1.超声粉碎加Tripure的方法是结核杆菌总RNA提取的理想选择.2.检测结核杆菌mRNA时一定要用DNase消化基因组DNA的污染.3.结核杆菌在4ug/ml利福平含药液体培养基中培养24后,如检测不到mRNA的特异条带,即可定为利福平耐药.4.RT-PCR法检测结核杆菌mRNA有望应用于利福科的快速药敏试验.

目录

前言

第一部分建立结核分枝杆菌85B mRNA的RT-PCR检测方法

材料和方法

结果

分析与讨论

意义

第二部分建立基于mRNA检测的利福平快速药敏试验方法

材料和方法

结果

分析与讨论

第三部分20株临床分离株利福平药敏检测的两种方法比较

材料和方法

结果

分析与讨论

小结

参考文献

综述:结核分枝杆菌快速药敏方法学研究进展

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致谢