芯片技术用于APC基因启动子甲基化定量检测

摘要

目的研制抑癌基因APC启动子1A的甲基化定量检测芯片,对临床标本进行初步定量检测分析.方法采用脐带血DNA克隆体作为阴性、阳性质控品建立芯片,提取6例健康人的肺组织DNA、6例肺癌患者的肺组织和癌组织DNA,进行亚硫酸盐化学修饰,以甲基化特异性引物进行基因扩增,与探针杂交检测,并进行甲基化特异性序列分析.结果甲基化阳性、阴性质控品的芯片检测与测序结果吻合.687、707、714、719和726共5个位点的荧光强度标准曲线的R2为0.93～0.99.687、707、714、719和726共5个位点非甲基化的检测范围:(0±8.7)%、(0±17.6)%、(0±17)%、(0±13)%、(0±8)%;甲基化杂合型的检测范围:(50±3.6)%、(50±6.9)%、(50±3.5)%、(50±8.5)%、(50±7.3)%.标本的芯片检测与测序结果一致.结论本研究首次建立了以微阵列技术为基础的APC基因启动子甲基化定量检测芯片.