Polo-like激酶1反义RNA对肺癌细胞A549细胞周期的影响

摘要

背景与目的Polo-Like激酶1(Polo-likekinase 1,Plk1)是参与有丝分裂调控的重要分子,已在肺腺癌细胞株A549中检测到Plk1的高表达,并认为Plk1高表达与肺癌患者的放化疗耐受和预后相关。本研究利用反义RNA技术,探讨Plk1基因表达下调对肺癌细胞细胞周期的影响。方法培养肺腺癌细胞株A549,构建表达Plk1反义RNA的质粒pcDNA3.0-Plk1(pc3.0P),通过脂质体介导转入A549细胞,Westernblot、RT-PCR检测Plk1的表达,BrdU脉冲标记和流式细胞术分析细胞周期变化;免疫荧光染色检测α微管蛋白的表达。结果A549细胞转染pc3.0P后,Plk1mRNA的表达较对照组显著下降(P<0.05),转染24h后Plk1mRNA的表达下降46.75%,转染48h后下降61.84%;蛋白表达亦有下降;S期细胞百分数(BrdU标记指数)较对照组明显下降(P<0.05),转染后48h仅有25.59%;转染后72h出现G2/M期阻滞(P<0.05),并出现细胞凋亡;微管染色显示细胞周边缺乏微管的聚集,单极纺锤体形成。结论Plk1影响纺锤体微管的形成,使A549细胞增殖速度减慢,细胞周期阻滞并发生凋亡。