提高三角酵母细胞DAO表观活力的透性化研究

摘要

三角酵母(Trigonopsis variabilis)的D-氨基酸氧化酶(D-amino acidoxidase,DAO,EC1A4.3.3)是一种胞内酶,完整细胞并不呈现酶促活性.为了获得三角酵母细胞的较高表观活力,需对细胞进行处理以改变壁和膜对反应底物和产物的通透性.研究中比较了冻融、丙酮、丁醇和十六烷基三甲基溴化铵(Cetyltrimethylammonium bro-mide,CTAB)等理化因子的透性化效率,并对丙酮的透性化条件进行了优化.证明丙酮的透性化作用与溶剂浓度、保温时间和温度有关.30%～35%丙酮浓度,4～28℃保温,可得到最大酶活力.透性化所需时间极短,在5min内即可完成.同时,透性化细胞中的DAO比无细胞抽提液中的酶对热更为稳定.用丙酮透性化细胞作为生物催化剂可有效地转化头孢菌素C(Cephalosporin C,CPC)为戊二酰-7ACA(Glutaryl-7-ACA,GL-7ACA).