来源于Escherichia coli的高比活植酸酶基因的高效表达

摘要

高效表达高比活植酸酶是进一步提高植酸酶发酵效价、降低植酸酶生产成本的一个有效途径.对源于Escherichia coli的高比活植酸酶基因appA,按照毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏爱进行了密码子优化改造.该改造后的基因appA-m按正确的阅读框架融合到毕赤酵母表达载体pPIC9上的α-因子信号肽编码序列3′端,通过电击转化得到重组转化子.对重组毕赤酵母的Southern blotting分析证实植酸酶基因已整合到酵母基因组中,并确定了整合基因的拷贝数.Northern blotting分析证实植酸酶基因得到了正常转录.SDS-PAGE分析和表达产物的研究表明,植酸酶得到了高效分泌表达,在5L发酵罐中植酸酶蛋白表达量达到2.5mg/mL发酵液, 酶活性(发酵效价)达到7.5×106IU/mL发酵液以上, 大大高于目前报道的各种植酸酶基因工程菌株的发酵效价.