瑞氏木霉表达黑曲霉葡萄糖氧化酶

摘要

利用高表达分泌纤维素酶的真菌瑞氏木霉表达重组的黑曲霉葡萄糖氧化酶.在大肠杆菌DH5α中构建瑞氏木霉纤维素酶CBHI启动子和CBHI信号肽基因-黑曲霉葡萄糖氧化酶基因-瑞氏木霉纤维素酶CBHI终止子-构巢曲霉的甘油醛3磷酸脱氢酶启动子-大肠杆菌抗潮霉素B磷酸转移酶基因-构巢曲霉色氨酸C终止子-pUC19(命名为pCBHGOD)质粒,线性化后用瑞氏木霉纤维素酶CBHI启动子和CBHI信号肽基因-黑曲霉葡萄糖氧化酶基因-瑞氏木霉纤维素酶CBHI终止子-构巢曲霉的甘油醛3磷酸脱氢酶启动子-大肠杆菌抗潮霉素B磷酸转移酶基因-构巢曲霉色氨酸C终止子(命名为CBHGOD)核酸片段转化瑞氏木霉QM9414原生质体.用PCR扩增方法筛选出同源重组葡萄糖氧化酶基因的瑞士木霉突变株.用麦杆诱导瑞氏木霉突变株,生产黑曲霉葡萄糖氧化酶,Western blot分析重组的葡萄糖氧化酶分子量与Sigma公司的天然黑曲霉葡萄糖氧化酶一致,生产的重组酶活性25u/mL,相当于Sigma公司葡萄糖氧化酶标准品的产量为O.5g/L.瑞氏木霉可用于生产黑曲霉葡萄糖氧化酶.