黑曲霉F044脂肪酶的分离纯化及酶学性质研究

摘要

黑曲霉F044脂肪酶发酵上清液经硫酸铵沉淀、透析、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析得到电泳纯的脂肪酶,纯化倍数为73.71倍,活性回收率为34%.对纯化脂肪酶性质研究表明:该脂肪酶分子量约为35～40kD,水解橄榄油的最适温度和最适pH分别为45℃和7.0,在60℃以下和pH 2.0～9.0之间有很好的稳定性.该脂肪酶的水解活性对Ca2+表现明显的依赖性,而Mn2+、Fe2+和Zn2+对脂肪酶则有显著的抑制作用.在最适条件下水解pNPP的Km和Vmax分别为7.37 mmol/L和25.91 μmol/(min·mg).其N-端的15个氨基酸序列为Ser(Glu/His)-Val-Ser-Thr-Ser-Thr-Leu-Asp-Glu-Leu-Gln-Leu-Phe-Ala-Gln.