羊朊毒体单抗结合表位分析

摘要

通过分段表达PrP核心片段和人工合成多肽,分析5株羊朊毒体单抗结合表位.分段表达PrP核心片段,通过PCR方法扩增目的片段,经酶切、连接后,将目的片段插入质粒pET32a,在大肠杆菌BL21中表达.将表达的系列融合蛋白与单抗进行免疫转印试验,根据反应情况确定单抗结合的大致部住.在此基础上设计合成多条针对性多肽,用ELISA方法进一步确定3株单抗的结合部位;通过与6段融合蛋白反应证明5株单抗的结合部位分别为:2H3在199 aa～213 aa之间,4C6、5F11和7F11在139 aa～168 aa之间,7F1在214 aa～227 aa之间,与3段人工合成多肽进行ELISA反应进一步得到4C6、5F11和7F11抗原结合表位在149 aa～158 aa之间;本研究确定了5株单抗在PrP分子上的结合部位,为羊痒病和牛海绵状脑病的检测、发病机制的研究奠定了基础.