猪β防御素2与猪γ干扰素在毕赤酵母中的融合表达及生物学活性比较

摘要

为了研究猪β防御素2(PBD-2)与猪γ干扰素(PoIFNγ),采用重叠延伸PCR法合成嵌合编码序列PBD-2-PoIFNγ,在此序列的基础上扩增PoIFNγ基因,并分别克隆入毕赤酵母表达载体pPICZαA,构建重组表达质粒pPICZαA-PBD-2-PoIFNγ与pPICZαA-PolFNγ.经Sac Ⅰ线性化,电击转化巴斯德毕赤酵母X33,筛选阳性重组子,在含0.5%甲醇的BMMY培养基中诱导72 h.SDS-PAGE及Western blotting结果表明,所获得的重组子能够分别分泌表达PBD-2-PolFNγ融合蛋白与PoIFNγ.琼脂扩散法和细胞病变抑制法未检测到融合蛋白的抑茵和抗病毒活性,而PoIFNγ具有明显的抗病毒活性.圆二色谱分析显示PoIFNγ与PBD-2-PoIFNγ的螺旋和无规则卷曲含量差别较大,推测是融合蛋白未能正确折叠影响了PBD-2-PoIFNγ的活性.