DNA环介导恒温扩增技术快速检测霍乱弧菌

摘要

霍乱弧菌是一种重要的食源性致病茵,主要引起急性肠道传染病,其快速检测具有重要意义.根据霍乱弧菌的mdh管家基因序列,设计2对特异性检测引物,利用DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermalamplification,LAMP),经反应体系优化,成功建立了霍乱弧茵的LAMP快速检测方法.该方法最佳反应温度为65℃,60 min完成检测,对培养茵的检测限为25 CFU/mL,污染食品中霍乱弧茵的检测限为32 CFU/g.对33株同种或近源细菌进行LAMP检测,仅霍乱弧茵得到阳性扩增.LAMP方法实践应用结果表明,对1057份虾、蟹、牡蛎、肉类、人腹泻物等样本进行检测,共检出85份阳性,与国际标准(ISO TS 21872-1-2007)检测结果的符合率为100%.结果表明,本研究建立的霍乱弧茵LAMP检测方法特异性强、灵敏度高,操作简便,有利于霍乱弧菌疫情的监测.