途径工程及Tn5转座子介导突变提高大肠杆菌丙酮酸生产

摘要

为了开发丙酮酸高产菌株,以大肠杆菌MG1655为出发菌株,通过基因敲除阻断副产物途径构建了产丙酮酸大肠杆菌工程菌KLPP.进一步利用pUT Mini-Tn5载体进行转座子随机突变,构建了含有7 197个单克隆的突变体文库.使用基于丙酮酸的二硝基苯肼显色法,建立了96孔板-酶标仪快速筛选方法,经过两轮的筛选,成功筛选到了6个突变体菌株,比KLPP丙酮酸产量提高了38％、31％、19％、28％、44％和14％.利用全基因组重测序确定了其转座子插入的位置,进而确定了可能影响丙酮酸产量的基因位点,为后续菌株改造工作奠定了基础.