人尿胰蛋白酶抑制剂的快速纯化

摘要

目的以人尿浓缩物为原料,对人尿胰蛋白酶抑制剂的分离纯化技术进行研究.方法利用纯胰蛋白酶作为配体偶联于CNBr-Sepharose-4B为亲和载体,在不同条件下洗脱亲和蛋白,可从粗品溶液中快速分离纯化具有胰蛋白酶抑制活性的两种纯产物.结果层析图谱与SDS-PAGE分析表明,根据洗脱条件,可将有抑制活性的20 kD和40 kD蛋白质分离为两个单独组份或混合物.其中20 kD组份的抑制活性回收为35%,抑制比活为3 387 U/mg;40 kD组份的相应值分别为53%和3 116 U/mg.混合物的抑制活性回收和抑制比活分别为89%和3 076 U/mg,再经Superose-12或Superdex-75凝胶渗透层析,分别获得两种组份的纯产物.结论通过选择性洗脱亲和柱,可快速获得高收率、高纯度的人尿胰蛋白酶抑制剂.