羧甲基茯苓多糖抗乙型肝炎病毒的体内与体外研究

摘要

目的 探讨羧甲基茯苓多糖(carboxymethyl-pachymaran,CMP)抗HBV、调节免疫、抗肝纤维化的作用及其机制.方法 体外实验:人肝癌HepG 2.2.15细胞株作为细胞模型,分为阴性对照组、CMP(1.5、3.0、6.0、12.0 mg/mL)组和阳性对照阿昔洛韦(aciclovir,ACV,浓度分别为0.5、1.0、1.5 mg/mL)组,MTT法观察CMP的细胞毒作用,ELISA法测定2.2.15细胞上清中HBsAg和HBeAg的含量.体内实验:采用四氯化碳复合因素法制作SD大鼠肝纤维化模型,分为正常对照组、模型组、CMP组,香菇多糖组及秋水仙碱组,每组10只,免疫组织化学法观察CMP对转化生长因子β(TGF-β)、细胞凋亡相关因子caspase-3、Ⅲ型胶原(collagen-Ⅲ)、层粘蛋白(laminin)的影响,Western blot检测Smad3、Smad7的表达.结果 体外实验:CMP对HepG2.2.15细胞株的半数毒性浓度(TC50)为13.61 mg/mL,对HepG2.2.15细胞株HBsAg、HBeAg分泌的半数有效浓度(IC50)分别为4.38 mg/mL、5.78 mg/mL,治疗指数(TI)值分别为3.15和2.45,CMP对HBsAg和HBeAg有抑制作用,并且抑制HBsAg和HBeAg分泌的作用优于ACV.模型组与TGF-β、caspase-3、Ⅲ型胶原、层粘蛋白的表达高于正常对照组(P＜0.01);CMP,香菇多糖,秋水仙碱能够降低肝纤维化大鼠肝脏中TGF-β、caspase-3、Ⅲ型胶原、层粘蛋白的表达(P ＜0.05,P＜0.01).模型组Smad-3的表达高于对照组、Smad-7的表达低于对照组(均P＜0.01);CMP,香菇多糖,秋水仙碱能够降低肝纤维化大鼠Smad-3的表达、升高Smad-7的表达(均P＜0.01).CMP显示了较好的抗纤维化作用,与香菇多糖组比较无统计学差异.结论 通过体内和体外实验,证明CMP具有抑制HBV,调节TGF-β/Smad信号转导通路等作用,本研究为CMP在慢性乙型肝炎临床的应用提供了重要的理论和实验依据.