二重实时PCR快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

摘要

目的 建立二重实时聚合酶链反应(duplex real-time PCR) 快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA).方法 采用二重SYBR Green实时PCR快速检测MRSA的决定基因mecA和金葡菌的种特异性基因nuc,经熔解曲线分析鉴定产物.结果 所有MRSA菌株的熔解曲线均呈现mecA、nuc基因特异性的峰,甲氧西林敏感的金葡菌仅有nuc峰,耐甲氧西林的表葡菌仅有mecA峰,甲氧西林敏感的表葡菌与其他菌种的菌株无特异峰出现;当MRSA菌浓度达102cfu/ml时就可检出.在131株金葡菌中,30.53%(40/131)耐药;二重实时PCR扩增mecA基因29.01%(38/131)阳性,nuc基因100%阳性.单引物与二重实时PCR两者阳性扩增符合率为100%.结论 对mecA、nuc基因进行二重实时PCR能准确、快速地鉴定耐甲氧西林的金葡菌和凝固酶阴性的葡萄球菌.