单链抗体与lidamycin辅基蛋白融合蛋白工程菌的高密度发酵及其免疫活性

摘要

目的 实现抗Ⅳ型胶原酶单链抗体(Fv)与lidamycin辅基蛋白(LDP)结合构成的融合蛋白Fv-LDP产生菌的高密度发酵,并测定融合蛋白Fv-LDP免疫活性.方法 先在5L发酵罐中进行工程菌分批发酵和补料分批发酵,再用同定化金属亲和层析从菌体中纯化融合蛋白Fv-LDP,分步透析使之复性,酶联免疫吸附试验和免疫荧光细胞化学染色检测其免疫活性.结果 确定分阶段恒速补料分批发酵为工程菌最佳高密度发酵模式,融合蛋白Fv-LDP最高表达量为4g/L,A600为55左右,培养时问约14h.融合蛋白Fv-LDP对Ⅳ型胶原酶呈阳性免疫反应,能与PG细胞特异结合.结论 确定了工程菌高密度发酵工艺,融合蛋白Fv-LDP免疫活性良好,为融合蛋白Fv-LDP与lidamycin烯二炔发色团(AE)构成的小型高效化抗体药物Fv-LDP-AE的研究奠定良好基础.