荣昌猪白细胞介素15成熟肽基因的克隆、表达及其表达产物活性检测

摘要

运用RT-PCR技术从由刀豆蛋白(ConA)诱导培养的荣昌猪外周血淋巴细胞(PBMC)扩增出猪白细胞介素15(pIL-15)完整开放阅读框(ORF),共489 bp,编码162 aa.与已公布的2个猪IL-15基因核苷酸同源性均为99.4%.分子进化分析表明其与人及哺乳动物IL-15基因的进化关系较近,而与鸡的IL-15基因进化距离较远.运用PCR技术从含荣昌猪IL-15开放阅读框序列质粒中扩增其成熟蛋白编码基因,共345 bp.将其定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)后在E.coli BL21中诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达的融合蛋白约为34 ku,重组蛋白以包涵体形式表达,表达产物约占菌体总蛋白的38.7%;Western blot分析表明,在相对分子质量34 ku处有一条特异性带;对诱导重组菌进行转录检测得到约356 bp的特异性片段.MTT法试验证实,表达产物初步纯化、透析复性后,可明显增强淋巴细胞的增殖.荣昌猪IL-15成熟肽成功在体外表达,获得的高效表达的产物具有一定的生物学活性.