胸腺素TP5-囊素样肽融合基因的克隆、表达及活性检测

摘要

胸腺素TP5和囊素(BS)作为免疫活性因子，具有重要的免疫学功能，能够刺激淋巴细胞增殖、分化和成熟，在临床上具有广阔的应用前景，但两者在基因水平的联合应用尚未见报道。为了研究重组胸腺素TP5-囊素样肽的生物学活性，本研究根据大肠杆菌偏嗜密码子用SOE-PCR合成重组胸腺素TP5-囊素样肽基因，扩增产物经EcoR I和xhoI双酶切后插入载体pET32a中，通过T4 DNA连接酶转入大肠杆菌DH5α，构建重组质粒pET32a-TP5-BS;重组质粒转入大肠杆菌BL21，筛选阳性重组菌株经IPTG诱导分析重组胸腺素TP5-囊素样肽在大肠杆菌中的表达，同时进行诱导表达条件的优化和可溶性表达分析。表达产物经蛋白质Ni柱亲和层析纯化后，进行MTT活性检测。结果显示，SOE-PCR扩增出147bp的DNA片段，与预期设计大小完全一致;将其克隆至表达载体pET32a中，重组质粒经缺失酶鉴定和序列测定正确，表明重组质粒pET32a-TP5-BS构建成功;用IPTG诱导重组菌株，电泳结果显示诱导的重组菌在24.8KD处出现了与预期相符的明显电泳条带，表明重组胸腺素TP5-囊素样肽在大肠杆菌中获得了表达;SDS-PAGE电泳显示重组胸腺素TP5-囊素样肽能够可溶性表达;MTT试验结果表明重组的胸腺素TP5-囊素样肽具有生物学活性。细胞样肽PAGE本研究初步研究了重组胸腺素TP5-囊素样肽的免疫活性，为进一步研究其生物学功能奠定基础。