肝靶向肽-人肿瘤坏死因子融合基因的克隆、可溶性表达及鉴定

摘要

目的获得可溶性且纯度高的肝靶向肽-人肿瘤坏死因子融合蛋白。方法首先以HepG2 cDNA为模板,RT-PCR克隆人肿瘤坏死因子(TNFα)基因,SOEing PCR扩增肝靶向肽-人肿瘤坏死因子(CSP-TNFα)融合基因,通过双酶切连接构建融合基因原核表达载体,利用ProtParam对原核表达载体中CSP-TNFα开放阅读框进行生物信息学分析,最后进行可溶性表达和Ni柱纯化并SDS-PAGE和Western-blot鉴定。结果获得TNFα基因序列、CSP-TNFα融合基因和表达载体CSP-TNFα/pET21b;融合基因编码融合蛋白CSP-TNFα含有肝靶向肽CSPⅠ-plus-人肿瘤坏死因子TNFα-纯化标签6*His,稳定性较好,有利于原核系统表达。在20℃,诱导20 h,融合蛋白CSP-TNFα可溶性表达成功;纯化后融合蛋白纯度约97%。结论成功克隆肝靶向肽-人肿瘤坏死因子CSP-TNFα融合基因,并获得较纯的可溶性CSP-TNFα融合蛋白,为下一步研究其生物学活性奠定了基础。