猪α干扰素与白介素-18融合基因的克隆、原核表达及其抗病毒活性的初步研究

摘要

为了探索猪α干扰素(poIFN-α)与白介素-18(poIL-18)融合基因的抗病毒效果,本研究通过融合PCR,以质粒pMD1 8-T/poIFN-α和pMD18-T/poIL-18为模板扩增猪IFNα-IL18(poIFNα-IL18)融合基因.将poIFNα-IL18融合基因插入原核表达载体pET-28b(+)构建重组表达质粒pET-28b/poIFNα-IL 18,转化大肠杆茵BL21感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE分析重组表达蛋白;经镍琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化后,用微量细胞病变抑制法在PK-15/VSV系统上进行抗病毒活性测定.结果表明成功构建重组表达质粒pET-28b/poIFNα-IL18;SDS-PAGE可检测到相对分子质量为37 ku左右的蛋白条带,与目的蛋白大小相近;经镍琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化,获得高纯度重组蛋白;用微量细胞病变抑制法在PK-15/VSV系统上检测到融合蛋白poIFNα-IL 18比单一蛋白poIFN-α和poIL-18的抗病毒活性更为显著,其抗水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)活性分别为1.03×105 U/mg、1.28×104 U/mg及0.11×104 U/mg.