大菱鲆胰岛素样生长因子-Ⅰ成熟肽的克隆、重组表达及活性分析

摘要

通过RT-PCR方法从大菱鲆肝组织克隆了胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-I)成熟肽片段,分析表明,此成熟肽由70个氨基酸残基组成,含有3个链内二硫键.将扩增片段克隆到原核表达载体pGEX4T-1上,实现了IGF-I成熟肽和GST蛋白在Escherichia coli BL21(DE3)plysS中的融合表达.融合蛋白分子量约为34 ku,诱导4 h时占菌体总蛋白的59%,主要以包涵体形式存在.Western-blottling免疫印迹表明,融合蛋白可以特异性地被anti-GST抗体识别.包涵体经6 mol/L盐酸胍变性溶解及脉冲法稀释复性后,通过GSTrap FF亲和预装柱纯化,获得了电泳分析纯的融合蛋白.以细胞增殖实验检测蛋白生物活性,结果显示,纯化蛋白能促进大菱鲆肾脏细胞的增殖.