麻鸭IL-18成熟蛋白基因的克隆、表达及其表达产物的生物学活性检测

摘要

应用RT-PCR技术,直接从麻鸭(Tadorna ferruginea)脾淋巴细胞总RNA中扩增出麻鸭IL-18成熟蛋白(mDuIL-18)基因,克隆到pGEM-T Easy载体.测序结果表明获得了mDuIL-18基因,其大小为513 bp,并将该基因亚克隆到原核表达载体pQE30.SDS-PAGE可检测到分子质量为19.76 kD的重组蛋白,Western blot证实该重组蛋白可与兔抗鸡IL-18血清发生特异性反应.表达产物以包涵体形式存在,经变性和复性处理后明显促进鸭T细胞转化.用mDuIL-18(150或200 ng/鸭)和禽流感病毒(AIV)疫苗免疫鸭2周后,血凝抑制(HI)抗体平均滴度达到7.5～7.7 log2,而只用AIV疫苗免疫和用mDuIL-18(100 ng/鸭)和AIV疫苗免疫的HI抗体平均滴度仅达到6.3～6.6 log2,表明mDuIL-18提高AIV灭活油乳苗诱导的免疫应答.